Efecto hipoglicemiante de la planta Bauhinia purpúrea L., en ratones euglicémicos / Hipoglicemic effect of Bauhinia purpúrea L., in euglicemic mice

La Diabetes Mellitus (DM) es una enfermedad metabólica que se caracteriza por presentar valores elevados de glicemia debido a la disminución total o parcial de la insulina en el organismo y/o resistencia a la misma por los tejidos periféricos. Las complicaciones de la DM son cada vez más frecuentes, por lo tanto se hace necesario incentivar la búsqueda de nuevos fármacos hipoglicemiantes que complementen el protocolo actual de tratamiento. La Bauhinia purpurea L., es una planta abundante en el estado Aragua, frecuentemente usada en la medicina tradicional para el control de la DM. El objetivo principal de esta investigación fue comprobar el efecto hipoglicemiante de B. purpurea L., para lo cual se realizó un estudio experimental, tipo exploratorio, descriptivo y analítico, donde se utilizaron 12 ratones machos euglicémicos, divididos en dos grupos, experimental y control. Al grupo experimental se le administró extracto acuoso de la planta B. purpurea L., vía intraperitoneal (7 mg/Kg / dosis) y a los del grupo control se administró solución salina al 0,9% en la misma cantidad y por la misma vía. Se encontró una disminución significativa (p<0.03) de la glicemia después de la administración del extracto y en comparación con la glicemia medida en el grupo control después de la administración del placebo. Esto demostró la actividad hipoglicemiante de la planta, por lo que es importante identificar el principio activo responsable de disminuir la glicemia y considerar incorporarlos en la preparación de medicamentos con efectos hipoglicemiantes.

Diabetes Mellitus (DM) is a metabolic disease that is characterized by elevated blood glucose values due to total or partial reduction of insulin in the body and / or resistance to it by the peripheral tissues. Complications of DM are increasingly common, therefore it is necessary to encourage the search for new hypoglycemic drugs to supplement the current treatment protocol. The Bauhinia purpurea L., is an abundant plant in the state of Aragua, frequently used in traditional medicine for the control of DM. The main objective of this research was to test the effect of hypoglycemic B. purpurea L., which conducted a pilot study, exploratory, descriptive and analytical, which used 12 male mice, euglicémic divided into two groups, experimental and control. The experimental group was administered aqueous extract of the plant B. purpurea L., intraperitoneally (7 mg / kg / dose) and control group was administered saline 0.9% in the same amount and in the same way. We found a significant decrease (p <0.093) in blood sugar after administration of the extract and comparing the blood glucose measured in the control group after administration of placebo. This demonstrated the hypoglycemic activity of the plant, so it is important to identify the active ingredient responsible for reducing blood sugar and consider incorporating them in the preparation of drugs with hypoglycemic effects.

Actividad ATP hidrolasa asociada a ribosomas humanos como nuevo indicador para evaluar fármacos in vitro / Human ribosome-associated ATPase activiry as a new indicator for in vitro evaluation of drugs

En todos los ribosomas de mamíferos estudiados hasta el presente se ha identificado una actividad ATP hidrolasa (ATPasa) asociada. Su papel en el mecanismo de síntesis de proteínas está siendo estudiado actualmente y existen evidencias de homología funcional con el factor de elongación 3 (EF3) de hongos. Para caracterizar la actividad ATPasa ribosomal humana, se aislaron ribosomas 80S de placenta humana y se estudiaron los parámetros cinéticos de dicha actividad. La velocidad de hidrólisis (0,50 ± 0,05 nmol Pi/A260 80S/min) a concentración fisiológica de ATP (3 mmol/L) y la constante de catálisis aparente (0,5 ± 0,1 sˉ¹) están en el rango de Vmax (0,65 nmol Pi/A260 80S/min) y Km (58 µmol/L), determinados por análisis de Lineweaver-Burk, también son comparables a los reportados para ribosomas de otros mamíferos. El análisis de Eadie-Hofstee indicó la presencia de cooperativa positiva, con un Km aparente de 15 µmol/L para la forma más activa de la enzima. La ATPasa fue inhibida por metavanadato (inhibidor de EF3), y por los antibióticos emetina (inhibidor de la translocación) y anisomicina (actúa sobre los sitios ribosomales A y E). Además, la actividad no fue afectada por antibióticos específicos para otras funciones ribosomales en eucariotes ni tampoco por bloqueadores del ribosoma bacteriano. La sencillez y bajo costo del ensayo de actividad ATPasa ribosomal lo hacen ideal para el diseño de pruebas de alto rendimiento in vitro que harían posible tomar decisiones tempranas sobre el posible uso terapéutico en humanos de nuevos antibióticos o funguicidas

Optimización de un sistema de traducción in vitro derivado de placenta humana para la evaluación de antibióticos / An in vitro translation system derived from human placenta for evaluation of antibiotics

Un sistema de traducción in vitro derivado de placenta humana es una herramienta útil para estimar el efecto que tendrían antibióticos nuevos sobre la síntesis de proteínas en células humanas. Una modalidad simple de ensayo in Vitro es la síntesis de polifenilalanina o poli(Phe), dependiente del ARN sistético poli(U). Para optimizar este ensayo, se purificó ARNtPhe homólogo, partiendo de ARNt total de placenta, mediante una combinación de cromatografía hidrofóbica y de alta presión en fase reversa (RP-HPLC). Al incorporar el ARNTPhe purificado a los ensayos se duplicó la eficiencia de síntesis de polo(Phe) con respecto a la obtenida con un ARNt total heterólogo de levadura. El sistema de ensayo optimizado fue usado para determinar el efecto de antibióticos sobre la elongación de polipéptidos por ribosomas humanos. La actividad ribosomal eucariota (ciclo-heximida y emetina, IC50 ˜= 40-60 µmol/L y 10-30 µmol/L, respectivamente). Por el contrario, antibióticos que actúan sobre el ribosoma bacteriano (cloranfenicol, azitromicina, y clindamicina) no mostraron efecto inhibitorio aún a concentraciones altas (hasta 1 mmol/L). Estos resultados demuestran la sensibilidad diferencial esperada del sistema in vitro y su potencialidad para ser utilizado en una evaluación temprana y rápida del efecto de antibióticos de nueva generación sobre la síntesis de proteínas con ribosomas humanos. Por lo tanto, el sistema de ensayo in Vitro permitiría seleccionar aquellos compuestos con mejores posibilidades para las pruebas posteriores necesarias para establecer su uso terapéutico en humanos

Efficient and faithful in vitro translation of natural and synthetic mRNA with human ribosomes.

Efficient systems for in vitro translation are of importance for biochemical and gene expression studies as well as for biotechnological developments. We optimized a cell-free translation system using subcellular fractions from human placenta and high quality placental tRNAs isolated using a simple and fast procedure. The postmitochondrial fraction or a reconstituted system containing soluble proteins plus polysomes were able to efficiently translate endogenous and exogenous mRNAs. Optima for ions, enzymes, tRNA and energy mix components were determined for a poly(U)-directed poly(Phe) synthesis test. The use of homologous tRNAPhe, omission of commercial creatine kinase, and addition of 3.5 mM spermidine at near physiological magnesium concentration (2.5 mM), were the most significant improvements. Under optimal conditions, poly(Phe) synthesis proceeded at a maximal initial rate of 1.2 Phe/80S/min at 37 degrees C, while natural mRNA translation by S-30 started at a near in vivo estimated rate of 0.3-0.5 amino acid/80S/sec. Furthermore, natural mRNA directed the synthesis of a family of polypeptides closely resembling the pattern of cytoplasmic proteins in both, molecular weight and relative amounts. This efficient and faithful system is of interest for biochemical studies of the human translational machinery, as well as a basis for screening new drugs affecting protein synthesis in pathogenic microorganisms.